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公司介绍
安捷伦是生命科学、诊断和应用化学市场领域的领导者。公司为全世界的实验室提供仪器、服务、消耗品、应用与专业知识,以帮助客户获得他们所寻求的深入见解。安捷伦的专业知识和深受信赖的合作能力,使得客户对我们提供的解决方案满怀信心。安捷伦将其专业技术聚焦于六个关键领域,在这些领域中我们将帮助客户实现目标:食品:安捷伦致力于确保我们的全球食品
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  • question 求安捷伦1260液相色谱 工作站的详细操作方法

    • answer Agilent 1260 HPLC 操作规程

      1 开机
      1.1打开电脑
      1.2打开液相色谱各个模块的电源
      1.3双击桌面“LC1260(Online)”,进入联机界面
      1.4排气:
      1.4.1手动旋开泵处冲洗阀(逆时针旋转约1圈)
      1.4.2右键单击“Pump”图标区域,选择“Method”选项,进入泵编辑画面,设
      流速:5ml/min,点击“确定”;
      1.4.3右键单击“Pump” 图标区域,点击“Control”选项,选中“ON”,点击“确
      定”,则系统开始冲洗,直到管线内(由溶剂瓶到泵入口)无气泡为止(一般为5分钟),切换通道继续冲洗,直到所有要用通道无气泡为止;
      1.4.4右键单击“Pump” 图标,点击“Method”选项,设流速:0ml/min,手动
      旋紧冲洗阀;
      1.4.5右键单击“Pump”图标,点击“Method”选项,按照方法要求选择合适比例
      的流动相,设流速:1.0ml/min;(不一定是1)
      1.4.6同理右键单击“Column Comp”,“DAD”图标,点击“Method”选项,按照
      方法的要求设置温度,波长,点击“控制” 选项,“ON”打开柱温箱和检测器。
      2编辑方法
      2.1点击“Method”—— “Edit EntireMethod”开始编辑完整方法;
      2.2选中除“Data Analysis ”外的三项,进入下一选项卡,选择“Als”(自动进样),点击“OK”,进入下一选项;
      2.3选择“Method”菜单下“Method Information”选项,在“Method Comments”中加入方法的信息(如:This is for test!),选择“OK”,进入下一选项;
      2.4泵参数设定:右键单击“Pump”图标,点击“Method…”选项,设置“Flow”:如1.0ml/min;“Stop Time”:如10 min(该停止时间仅为做一个样品需要的时间),按照要求选择合适比例的流动相配比,选择“OK”,进入下一选项;
      2.5自动进样器参数设定:右键单击“Sampler”图标,点击“Method”选项,选
      择“Injection volume”,输入进样体积,选择“OK”,进入下一选项;
      2.6 柱温箱参数设定:右键单击“Column Comp”,点击“Method”选项,设置“Left”温度(可设置温度范围:低于室温10℃-80℃),一般“Left”和“Right”温度一致,选择“Combined”绑定即可,“Stop Time”选择“As Pump /Injector”,选择“OK”,进入下一选项;
      2.7UV检测器参数设定: 右击“DAD” ,点击“Method…”选项,下方的空白处输入所需的检测波长(可根据需要选择多个波长,最多可选8个波长);“Stop Time”选择“As Pump /Injector”;“Spectrum” ——“Store”选项下,根据需要选择 “None”或“All(全波长扫描)”等选项,选择“OK”,进入下一选项;
      2.8 编辑方法完毕,从“Method”菜单中,选中“Save Method As”,输入一方法
      名,选择“OK”,保存方法成功。
      3单针进样
      3.1 从“Run Control”菜单中,选择“Sample Information”选项,输入“Operator Name”;在“Data File”中选择“Path”和 “Prefix/Counter(文件命名)”设置“Prefix(一般设置为年月日)”和“Counter”;输入“Location(样品位置)”和“Sample Name”,选择“OK”,进入下一选项;
      3.2基线平稳后选择“Run Control”中的“Run Method”选项,开始进样。
      4序列进样
      4.1 选择“Sequence”菜单下“ Sequence Table”选项,在“Confiqure Table”中选择需要选项,一般为“Vial(样品瓶)”,“Sample Name(样品名称)”,“Method Name(方法名称)”,“Inj/Vial(进样次数)”,“Sample Type(样品类型)”,“Datafile(文件名)”和“Inj Volume(进样体积)”;
      4.2点击“Inset”生成一行,设置上述参数,选中该行,点击“Copy”和“Paste”复制后修改相应参数,即生成序列表,选择“OK”,进入下一选项;
      4.3 点击“Sequence”菜单下“ Sequence Parameters”选项,选择序列数据的“Path”(序列会自动生成以“序列名称-时间”为名称的文件夹保存数据),数据建议选择 “Prefix/Counter”保存;在“Shutdown”选项下选中“Post-Sequence Command/Macro”,根据需要选择“PUMPALL OFF(序列结束后关闭泵)”” “LAMPALL OFF(序列结束后关闭紫外灯)”” “STANDBY(序列结束后关闭紫外灯和泵)”,选择“OK”,进入下一选项;
      (注:若“Path”中默认保存于C盘,则可点击“View”,选择“Preferences”,根据需要添加相应的“SequenceTemplates”“Data”“Master Methods”保存路径)
      4.4 从“Sequence”菜单,选中“Save Sequence Template As”,输入一序列名,选择“OK”,即可;
      4.5 基线平稳后选择“Run Control”中的“Run Sequence”选项,开始序列进样。
      (注:若中途停止运行,则选择“Run Control”中的“Stop Run/Inject/ Sequence”可保留图谱信息,若选择Abort,则所有图谱信息都丢失)
      5数据分析(脱机状态使用)
      5.1 双击“LC1260(Offline)”图标进入的脱机画面
      5.2 从“View”菜单中,点击“Data Analysis”进入数据分析画面
      5.3 从“File”菜单选择“Load Signal”,选中所需的数据文件名,点击“OK”,则数据被调出。
      5.4 谱图优化:从“Graphics”菜单中选择“Signal Options”。从“范围” 中选择“Full”或“Use Ranges” 选择所需“Time Range”和“Response Range”,选择“OK”;从“Integration”中选择“Integration Events”,调整“Area Reject”和“Height Reject”删除杂峰;点击“Set Integration”图标,可选择性消除不需要的积分,若想消除该操作,则选择“Method Manual Events”上排左起第5个图标进行移除操作即可,点击左边“√”图标,将积分参数存入方法并退出“Integration Events”。
      (注:“Set Integration”图标为)
      6 标准曲线绘制
      6.1 选择“Calibration”菜单下“New Calibration Table”,选择“Automatic Setup”中“Level(即标曲中对应的点,第一个点即为1)”和“Defanlt Amount(标准品对应点的浓度)”,选择“OK”;
      6.2通过选择“Calibration”菜单下的“Add Level”选项依次添加各点参数,若为外标法,在“ISTD”项下选“NO”,若为内标法则选“Yes”;“#”项下对应标准品和内标无的数字的应统一;若想更改标准曲线中的对应点;
      6.3 选择“Calibration”菜单下的“Recalibrate”项的“Mode”选项,选择“Average”则表示取当前点与标曲中对应点的平均值替代标曲中原对应点,若选择“Replace”则表示将当前点取代标曲中对应点;
      (注:修改“Defanlt Amount”中浓度单位的方法:选择“Calibration”项下“Calibration Setting”,修改“Amount Units”,设置浓度单位;选择“Calibration”项下“Calibration Setting”,修改“Default CalibrationCurve”,选择合适的曲线类型-Type,是否过原点-Origin和各点对于标准曲线的比重-Weight,通常选Equal)
      6.4调出样品谱图,点击需要计算浓度的色谱峰,选择“Report” 菜单中的“Specify Report”,选择“Report style”为“Detail”,点击“OK”后选择“打印预览”图标,在报告中即可体现计算结果。
      7 图谱重叠设置
      7.1 选择“File”菜单下“Overlay Signal”选项,选择任意需要重叠的图谱;
      7.2在“Signal”选项下,选择“3D Signal Overlay”图标(紧邻图谱上方左起第四个图标),在弹出的“Adjust Signal OverlayOptions”对话框中调节交错时间和高度;若想移除重叠谱图,点击第六个图标。
      8 信噪比等参数计算
      8.1 选择“Report”菜单中的“System Suitability”项下的“Edit Noise Range”选项,设置时间范围(超过1min);
      8.2 选择“Report” 菜单中的“Specify Report”,选择“Report style”为“Perfomance+Noise”,点击“OK”后,即可预览信噪比参数;
      8.3 选择“Report” 菜单中的“Specify Report”,选择“Report style”为“Extended Perfomance”,点击“OK”后,即可预览对称性、拖尾因子等所有参数。
      9 程序运行时检测出峰情况
      选择“File”菜单下的“Snapshot”选项即可。
      10 打印报告
      10.1 从“Report”菜单中选择“Report Mode”,选择“Use Classic Reporting”;
      10.2 从“Report”菜单中选择“打印报告”,则报告结果将被打印。
      11 关机
      11.1 冲洗色谱柱和系统后,退出化学工作站及其它窗口,关闭计算机;
      11.2关闭Agilent 1260各模块电源开关。

      仪器使用注意事项
      1.用棕色的溶剂瓶盛放水溶液或磷酸盐缓冲液.光照影响瓶中藻类的生长会堵塞溶剂过滤器,从而影响泵的运行。勿使用多日存放的蒸馏水。
      2.在比例阀的混合点,重力作用使盐颗粒沉淀下来,通常,下面阀A/D接水相/盐溶液,C/B接有机溶剂。使用盐时脱气机易堵,可将管路入口与出口反接,用60摄氏度的温水反冲,用针筒缓慢吸200mL左右。
      3. 流动相瓶中的滤头脏。压力波动,可将滤头拔下,检查是否与滤头有关。滤头污染,可用30%-35%的稀硝酸泡1-2h或过夜,看污染程度,最后用水冲洗干净,重新装好。
      4.seal-wash 用10%的异丙醇。使用缓冲盐时要加seal-wash选项,周期清洗。
      5.LAN与CAN不能串联,LAN接仪器,PC。CAN为模块间通讯。
      6.柱温箱选择3uL,减少死体积,延迟体积。
      7. 液相上各种灯颜色。电源打开后,四个模块左侧灯亮绿色。状态指示灯位于各自模块的右上方:呈黄色:该仪器在未准备好状态(Not-ready) 或正在自检。呈绿色:该仪器正在运行,采集数据(Run)。无颜色:该仪器已准备好等待运行(Pre-run)。呈红色:该仪器检测到有故障发生,仪器在错误状态,红色多发生于漏液时。
      8.过滤白头位于排气阀内,当系统压力有异常增高时,首先需要检查过滤白头是否阻塞了。判断的方法是:打开排气阀,以纯水作流动相,将流速设为5mL/min,如果泵压超过10bar,则说明过滤白头需要更换了。如果过滤芯的颜色发黑,说明是被柱塞密封垫磨损下来的碎屑堵塞的。
      9.毛细管线分类:0.17mm内径 ------绿色 ;0.12mm内径-------红;0.25mm内径-------蓝PEEK 管线:内径 -----0.18mm。
      10. 灯能量测试,先将灯预热,用水平衡系统。启动Agilent Lab advisor 进行测试。启动软件connect(界面右上部分) Service&Diagnostics(左侧导航栏) 选择G4212B Intensity Test Run 查看结果。
      11. 柱子存放:柱子填充乙腈或甲醇,两端堵头封存,每一个月重新使用乙腈或甲醇,填充封存。
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